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方法简介
质谱法能对侧链基团翻译后加工或化学修饰进行定位, 且弥补了传统ofEdman降解法不适用于N端封闭of缺陷. 且proteinofC末端analyze并不能采取类似N端of化学analyze, 现阶段is采取质谱法对protein样品ofC末端序列进行analyze. 质谱法N/C端测序can用于confirm重组proteinis否得到完整表达, as well as重组proteinN端andC端序列is否发生修饰. we首先analyze靶proteinof氨基酸序列信息, 选择特定ofproteinenzyme对靶protein进行enzyme切, 得到合适长度ofproteinN端andC端肽段, 然后进行质谱analyze, confirm靶proteinofN端andC端序列信息.
关于样品:canprovideprotein冻干粉或protein溶液; 至少need20ugofprotein, 纯度>90% ; 含盐量: 挥发性无机盐<20mM, 不挥发性无机盐<5mM; protein溶液避免SDSetc.变性剂, 表面活性剂, 不含tris缓冲体系.
样品transport:请using足量of干冰transport, 并尽量选用较快of邮递方式, 以降低transport过程中样品降解of可能性.
质谱法N/C端测序is一种importantof生物技术手段, 用于确定proteinofN端 (氨基端) andC端 (羧基端) 序列信息. 这些信息in生物制药, 生物医药as well as精准医疗etc.领域中具haveimportant意义, 可用于confirm重组proteinof完整表达, analyzeprotein修饰, as well as进行工艺optimizeetc..
质谱法be able to对proteinof侧链基团翻译后加工或化学修饰进行定位, 并candetermine封闭and修饰ofprotein末端. 其流程大致for首先analyze靶proteinof氨基酸序列信息, 选择特定ofproteinenzyme对靶protein进行enzyme切, 得到合适长度ofproteinN端andC端肽段, 然后进行质谱analyze, confirm靶proteinofN端andC端序列信息.
此外, 质谱法N/C端测序还具have高度ofAccuracy, 每pcs氨基酸have超过十种不同of肽段支持, 每pcs氨基酸in质谱图里have强of离子片段峰证据, 从而保证每pcs位点of氨基酸100%ofAccuracy.
尽管质谱法具have诸多优点, 但每种测序方法都have其局限性. 因此, in实际应用中, 可能need结合多种不同of测序方法, 以适应各种protein测序of需求. for example, 当Edman降解法无法解决N端封闭andprotein修饰of测序Question时, 质谱法can作forhave效of补充手段.
