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SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE) :SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠–聚丙烯酰胺) 凝胶电泳is一种canaccording toproteinof分子量分离样本中proteinof技术. protein分子in聚丙烯酰胺凝胶中电泳时, 它of迁移率取决于所带净电荷及分子of大小and形状etc.因素. such as果in聚丙烯酰胺凝胶系统中加入SDSand巯基乙醇, 则protein分子of迁移率mainly取决于它of分子量, 而with所带电荷and形状无关. 选择一系列不同分子量of球形或基本呈球形ofprotein作for标准物, 使其形成SDS复合物. 把这些复合物in相同条件下进行电泳分离, 分子量小of物质泳动距离大, 分子量大of物质泳动距离小. determine出相对泳动率, 用相对泳动率对proteinof分子量of对数作图, 它们in一定范围内呈直线关系. 因此可作for标准曲线来detect样品proteinof分子量. 目前,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE) mainly应用inprotein分子量determine, Specificityproteindetect, 菌种identifyetc.方面.
1.detecttissue量要求for100mg (即黄豆大小) ;
2.cell量要求for10^6及以上, cell收集方式 - - 贴壁cell: 倒掉Culture Medium, pbs清洗2-3times, 用cell刮收集cell, 2000g, centrifuge5min, 然后去掉上清液, cell沉淀干冰transport; 悬浮cell: 2000g, centrifuge5min, 然后收集cell沉淀, 干冰transport;
3.血液样本: 全血adoptingEDTA-抗凝管装, 至少1ml, 4度transport, Serum或白celladopting干冰transport;
4.剩余样本need返还of项目,need提前备注.
1.such as何读取SDS-PAGE结果
电泳后肉眼无法observe到protein分离, need后续ofstain技术. 考马斯亮蓝stainand银染is常规detectand定量电泳分离proteinof常用方法. 经过固定-stain-脱色etc.simpleprocess后, can清楚ofobserve到proteinof分布.
2.such as何储存SDS-PAGE凝胶
usuallyin每times实验之前准备新鲜ofSDS-PAGE凝胶. 然而凝胶也canin4℃of清水of储存约一weeks. such as果凝胶stain后不能及时拍照, 则need将其放入水中, 以防止凝胶干燥and收缩. recommend尽快拍摄stain结果, such as果凝胶长时间浸泡in水中, 条带会散开
