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激光扫描共聚焦显微镜 (Confocal laser scanning microscope, CLSM) is近代most先进ofcell生物医学analyzeinstrument之一. 它isin荧光显微镜成像of基础上加装激光扫描装置, using紫外光或可见光激光荧光探针, utilizing计算机进行图像process, 不仅可observe固定ofcell, tissue切片, 还可对活cellof结构, 分子, 离子进行实时动态地observeanddetect. 激光扫描共聚焦显微技术已用于cell形态定位, 立体结构重组, 动态变化过程etc.research, 并provide定量荧光determine, 定量图像analyzeetc.实用research手段, 结合其他相关生物技术, in形态学, 生理学, 免疫学, 遗传学etc.分子cell生物学领域得到广泛应用.
生物样品:
1. 请先in荧光显微镜下observe荧光表达is否正常, 以确定is否have必要using激光共聚焦;
2. 盖玻片厚度要求≤0.17mm;
3. 明确激发波长and发射波长;
4. 重构ofneed明确扫描区域大小, 位置, Z步进, 这些参数会影响测试时间;
5. 共聚焦要of标本一定要贴壁很好, 不能悬浮起来, need自己in载玻片上固定好后送样测试;
6. 做显微成像, 样品need加抗荧光淬灭剂, 盖玻片need固定.
材料样品:
1. mainly测试偏材料of样品, 样品提前制备好, such as果haveneed请提前联系is否can帮忙制样;
2. 拍出来most大面积for1.11x1.8mm到5x5mm范围内, 颜色可调. most大面积need多张图拼接而成, 若needmost大面积, 则需多times拍摄;
3.尺寸没have要求, 平整就行;
4, generally白光拍摄材料样品, 只provide2-3张图片, 若需更多图片, 请提前协商.
样品制备: 样品制备is影响CLSM成像质量of关键因素之一. in制备样品时, need选择合适of固定剂, 交联剂, have机溶剂etc., 以保证样品of完整性andantigen性. 同时, 样品of厚度, 透明度and荧光标记强度etc.也need进行optimize, 以获得most佳of成像效果.
instrument操作: in操作CLSM时, need严格遵守操作规程, 避免对instrument造成损坏或影响成像质量. for example, in开关机时need按照规定of顺序操作, 避免对激光器造成损伤; in调整扫描参数时, needaccording to实验要求and样品特性进行optimize, 以获得most佳of成像效果.
成像质量: CLSMof成像质量受到多种因素of影响, such as光源stable性, 光学元件of清洁度, 成像参数of设置etc.. 因此, in检查过程中neednote这些因素, 并及时进行调整andoptimize, 以获得高质量of成像结果.
Data Processing: inusingCLSM进行成像后, need对数据进行processandanalyze. inprocess数据时, neednote数据ofstore格式, 分辨率and色彩etc., 以便后续ofanalyzeandprocess. 同时, 也neednote数据of保密性andsafe性, 避免数据泄露或损坏.
激光扫描共聚焦显微镜 (CLSM) is一种高端of光学显微镜, be able to同时获取样品of形态and分子信息, 因此in生物医学research中具have广泛of应用. inusing激光扫描共聚焦显微镜进行检查时, neednote以下几点:
