One-on-one consultation
Scan QR code to consult
Contact: +86 15884474332
Professional & Reliable · PhD Expert Team
Credit Payment · Test First, Pay Later
High Cost-effectiveness · Quality & Affordable
Earn Points · Exchange for Rewards
Easy Reimbursement · Official Contract & Invoice
Reports Available · Apply Now
标记定量protein组学 (Quantitative Proteomics by TMT)
TMTis由Thermo Scientific公司研发出来of一种reagent, have两种不同of多标组合reagent, 非标forTMT6标andTMT10标.TMTreagentis由三部分组成: 报告基团 (6标实验相对分子质量分别for126,127,128,129,130and131;10标实验相对分子质量分别for126,127N,127C,128N,128C,129N,129C,130N,130Cand131),质量平衡基团and肽反应标记reagent基团.
in串联质谱analyze中, 报告基团, 质量平衡基团and多肽反应基团之间of键断裂, 质量平衡基团丢失, 带不同同位素标签of同一多肽产生4种或8种不同质量of报告离子, according to报告离子of丰度可获得样品间相同肽段of定量信息, 再经过软件process得到proteinof定量信息.近年来,TMT定量protein组学技术already成for一种veryimportantof质谱定量方法, 其基本技术路线such as下图
项目实验流程
TMT标记定量protein组学项目ofmainly步骤including:protein提取,protein定量,proteinenzyme解,肽段TMT标记,LC-MS/MSanalyze, 数据库检索, Data AnalysisandExperimental Reportetc..
本项目流程分for预备实验and正式实验两部分: 预备实验includingprotein提取, protein定量,SDS-PAGE凝胶电泳, proteinenzyme解, 质谱analyze, 数据库查询, Quality Controlas well as出具预备Experimental Reportetc.步骤; 正式实验isin预备实验of基础上进行of,对预备实验中质控合格of样本继续进行肽段TMT标记, 肽段分级as well asadopting高分辨质谱仪进行LC-MS/MSdetect,对获得of质谱数据进行Data Analysis并出具正式Experimental Report.
功能注释
gene本体 (Gene Ontology) is一pcs标准化ofgene功能分类体系, provide了一套动态更新of标准化词汇表, 并以此从三pcs方面描述生物体中geneandgene产物of属性: 参withof生物过程 (Biological Process) , 分子功能 (Molecular Function) andcell组分 (Cellular Component).usually情况下, 对目标protein集合ofGO功能注释of步骤and流程大致can归纳such as下图:
部分结果展示
| Sample Type | 送样量 | 预processandstore |
| 常规动物tissue (脑, 心, 肝, 脾, 肺, 肾, 肌肉, 皮肤etc.) | ≥50 mg | PBSwash去除残留血液and污染物, 迅速剥去脂肪and筋皮etc.结缔tissue, 冲洗干净. 用tissue剪或手术刀将tissue分离成1cm3左右of小块. 液氮速冻, storein-80°C, 干冰transport |
| 软体动物 (血吸虫, 旋毛虫etc.) | ≥500 mg | PBSwash去除来自宿主of污染. 液氮速冻, storein-80°C, 干冰transport |
| 动物软骨tissue | ≥200 mg | PBSwash, 用手术刀将软骨切成1cm3左右of小块. 液氮速冻, storein-80°C, 干冰transport |
| 动物毛发 | ≥200 mg | 用适量2%SDS, 50mM 磷酸钠 (pH7.8) 缓冲液漂洗样品, 去除污染物, 干燥, storein-80°C, 干冰transport |
| 柔软tissue (木本植物of叶, 花etc., 草本科植物, 藻类, 蕨类植物, 大型fungusetc.) | ≥100 mg | 收集样品, 液氮速冻 (such as果样品表面have泥土或明显污染物, 则液氮速冻前用PBS清洗, 吸水纸吸去表面液体) , storein-80°C, 干冰transport |
| 木本科植物of树根, 树皮, 树枝etc. | ≥5 g | 收集样品, 液氮速冻 (such as果样品表面have泥土或明显污染物, 则液氮速冻前用PBS清洗, 吸水纸吸去表面液体) , storein-80°C, 干冰transport |
| 果实, 种子 | ≥50 mg | 收集样品, 液氮速冻 (such as果样品表面have泥土或明显污染物, 则液氮速冻前用PBS清洗, 吸水纸吸去表面液体) , storein-80°C, 干冰transport |
| 果肉 | ≥5 g | 去皮切成1cm3左右小块, 液氮速冻, store于-80°C, 干冰transport |
| 花粉 | ≥10 mg | 植物开花期收集花粉, 解剖显微镜下检查花粉, 用解剖针去除花药碎片etc.杂质, 转入EP管中, 光学显微镜下检查花粉of形态and纯度. store于-80°C, 干冰transport |
| bacteria菌类 | ≥50 mg | 3000g-5000gcentrifuge5-15min, 去上清, PBSwash沉淀三times, 液氮速冻, 菌体-80°Cstore, 干冰transport |
| fungus菌体 | ≥5 g | PBS清洗, 吸水纸吸去表面液体, 液氮速冻, store于-80°C, 干冰transport |
| 悬浮culturecell | ≥2×10^7 | 1)400g-1000gcentrifuge10minutes收获cell, 弃上清. 2)用预冷ofPBS小心wash片状沉淀物2times, 置于冰上, 去上清. 3)液氮速冻, -80°Cstore, 干冰transport |
| 贴壁culturecell | ≥2×10^7 | 1)弃掉culture液, 并将culture皿倒置于吸水纸上吸干culture液 2) 加入4°C预冷ofPBS, 平放轻轻摇动1minuteswashcell, 然后弃去PBS. 重复以上操作两times以洗去culture液. 3)将culture皿置于冰上. 向culture皿内加入4°C预冷ofPBS. 用干净ofcell刮棒将cell刮于culture皿of一侧 (动作要快) , 冰上斜置culture皿, 使得缓冲液流向一侧. 移液管吸取溶解产物至预冷ofcentrifuge管内. centrifuge去上清. 4)液氮速冻, -80°Cstore, 干冰transport |
| Serum | ≥100 μL | 收集好of全血室温静置两hours, 3000gcentrifuge10min, 取上清, 液氮速冻, -80°Cstore, 干冰transport |
| 血浆 | ≥100 μL | 收集好of全血加入抗凝剂, 室温静止30minutes, 1300g-2000gcentrifuge10min, 取上清, 液氮速冻, -80°Cstore, 干冰transport |
| 动物乳汁或人乳汁 | ≥3 mL | 收集母乳, -80°Cstore, 干冰transport. 若要去除样品中of高丰度酪protein, need超速centrifuge除去 |
| 乳脂肪球膜protein (MFGM) , 即脂质层 | ≥150 μL | 收集母乳, 4度高速centrifuge15min, 取脂质层, 用预冷of5倍体积ofPBSwash3times, 纯水wash一times, -80°Cstore, 干冰transport |
| 脑脊液, 关节液, 淋巴液, 附睾腔液 | ≥50 μL | 1000g-2000gcentrifuge5min, (或using0.22µm滤膜过滤) , 取上清, -80°Cstore, 干冰transport |
| 唾液 | ≥100 μL | 禁食两hours以上, 9-12am取样, 1000g-2000gcentrifuge5min, (或using0.22um滤膜过滤) , 取上清, -80°Cstore, 干冰transport |
| 泪液 | ≥300 μL | 收集样品 (可utilizingcapillary micropipette或Schirmer strip) , 8000-14000g 4度 centrifuge5min, 取上清, -80°Cstore, 干冰transport |
| 尿液 | ≥10 mL | 5000×g 4°C centrifuge30-60min, 取上清, -80°Cstore, 干冰transport |
| 分泌protein-cell分泌液 | ≥5 mL | 10000g-20000gcentrifuge30-60min, (或using0.22um滤膜过滤) , 取上清, -80°Cstore, 干冰transport |
| 分泌protein-脑tissue分泌液 | ≥5 mL | 10000g-20000gcentrifuge30-60min, (或using0.22um滤膜过滤) , 取上清, -80°Cstore, 干冰transport |
| 分泌protein-间质液 | ≥100 μL | 样品收集, -80°Cstore, 干冰transport |
| IP样品 | ≥50 μg | 样品洗脱时, recommend采取酸性洗脱模式, wash buffer中不recommend含have去垢剂 (SDS,NP-40,Triton-X100) ,若needusing去垢剂作for洗脱溶液, 则needadoptingSDS-PAGE对样本进行预process, 送样前, 迅速液氮中速冻, 并store于-80°C中, 干冰transport |
Answer: TMT 技术using一种特殊ofreagent, 其中包含多pcs同位素标记of基团. 这些标记reagentwith肽段of N 端或赖氨酸侧链连接, 形成具have不同质量数of标记肽段. 标记后of肽段混合in一起, through质谱analyze, 每pcs标记肽段都会产生一pcs独特of报告离子. throughrelatively这些报告离子of强度, can定量不同样品中肽段of相对丰度, 进而推导出proteinof定量信息.
Answer: TMT 技术with iTRAQ 技术ofmainly区别in于标记reagentof种类and数量. TMT 技术usingof标记reagentcanprovide更多of标记组合, 从而允许in一times实验中同时analyze更多of样品 (most多可达 16 pcs) . 此外, TMT 技术of报告离子强度usually更高, 可能provide更好of定量Accuracy.
Answer: TMT 技术of优点including高通量, 高Sensitivity, 高Accuracyand灵活性. 该技术can同时analyze多pcs样品, 减少了实验时间and成本. TMT 标记reagentof设计使得标记过程相对simpleandrapid. 此外, 由于报告离子of强度较高, TMT 技术usually具have较好of定量Accuracy.
Answer: inusing TMT 技术进行protein组学research时, neednote样品of质量, 标记效率, 质谱analyzeof参数设置etc.Question. 样品应尽可能纯净, 以减少杂质对定量结果of干扰. 标记效率会影响定量Accuracy, 因此needoptimize标记条件. 此外, 质谱analyze过程中of参数设置也会影响定量结果ofAccuracyandreliable性.
Answer: TMT 技术广泛应用于生物学, 医学and药学etc.领域ofresearch. for example, 该技术can用于research疾病发生发展过程中ofprotein表达变化, 药物作用机制of探索as well as生物标志物of发现etc.. TMT 技术of高通量特性使其especially适用于大型research项目, such as人类protein组计划etc..
TMT (Tandem Mass Tag) 技术is一种用于protein组学researchof同位素标记定量方法. with iTRAQ 技术类似, TMT 也using特定of同位素标签来标记来自不同样品of肽段, 并through质谱analyze来relatively这些标记肽段of强度, 从而进行protein定量analyze. 以下is关于 TMT protein组技术detectproteinof一些常见疑问及其解A:
1, TMT 技术of工作原理is什么?
2, TMT 技术with iTRAQ 技术have何不同?
3, TMT 技术have哪些优点?
4, TMT 技术neednote哪些Question?
5, TMT 技术in哪些领域have应用?
