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1. Introduction:
Cytotoxicity detection is a type of biocompatibility test, To detect the toxicity of drugs or novel materials in biological environments, 即By detecting the effects of materials or drugs on cell proliferation or growth, To evaluate the toxicity or activity of drugs or materials, Mainly used for drug activity screening, cell增殖/毒性determine, Anti-tumor drug efficacy calculation of IC50, etc.; Commonly detected by MTT or CCK8 method, Additionally, cell imaging can be performed through Live/dead double staining, More intuitive recording of cell survival.
(一)CCK8测试
1.Experimental Principle
CCK-8(cell-counting kit-8) detectkitis应用WST-8取代MTT被还原,WST-8is一种类似于MTTof化合物, in电子耦合reagent存inof情况下, can被线粒体内of一些脱氢enzyme还原生成橙黄色offormazan. 对于同样ofcell, 颜色of深浅andcell数目呈线性关系. 应用enzyme标仪determine吸光值 (450nm) 并进行统计学计算便can获得cell毒性相关数据.
2.参考标准
GBT16886.5-2017医疗器械生物学evaluate第5部分: 体外cell毒性试验;ISO 10993-12 2007;
3. Experimental Procedure图
(二)MTT测试
1.Experimental Principle
哺乳动物胞of线粒体enzyme可将黄绿色ofMTT降解形成蓝紫色of物质, 用二甲基亚砜 (DMSO) 将其溶解成溶液, 用enzyme标仪determine其浓度 (570nm) , 从而定量determinecellof存活比例.
2. Experimental Procedure图
一, cell毒性交付结果
1.交付内容
(1) 将各组吸光度值输入Excel并计算相对活力 (相对活力%=实验组OD值/control组OD值均值×100%, 将相对活力数值输入GraphPad Prism作图, 结果such as下:
<图1> 不同浓度下cellof相对存活率, 注: withcontrol组relatively,**P＜0.01
二, cell死活stain-激光共聚焦交付结果
1.交付内容
2D模式拍摄: 每pcs样品3-4张图片, 其中①若一pcs样品拍摄1pcs倍数, 拍4pcs视野②若一pcs样品拍摄2pcs倍数, 各拍摄2pcs视野③若一pcs样品拍摄3pcs倍数, 各拍摄1pcs视野.
2.结果展示
1.块体类-薄膜, 布料, 金属块, 纸片, 凝胶etc.
(1) 送样量:a.withcellof作用方式for直接接触of话, 至少3pcs/种cell/时间点;b.样本process方式for浸提of话, 可参考国标ISO 10993-12 2007中of浸提方式浸提, according to浸提方式按量anddetect时间点provide;
(2) 制样要求: 若isneed把cell接种到材料上of话, 金属块, 凝胶类样本须制备成统一大小of圆形/方形, recommend制备直径for5-7 mm圆形. 布料, 纸片类样本可代for裁剪, 默认制备直径for6 mm.
2.液体类
送样量: according to测试时样本浓度anddetect时间点而定, 按照单timesdetectneedof3-5倍of量寄送; 若adopting稀释后样本测试, 则须告知稀释倍数及工作液浓度; 若溶剂forhave机溶剂 (such asDMSO, 醇类, 酚类etc.) , most高工作液浓度中, 溶剂of占比低于0.5%.
3.粉末类
送样量: according to测试时样本浓度anddetect时间点而定, 按照单timesdetectneedof3-5倍of量寄送; 其中:
a.可溶性粉末: 注明溶剂of种类 (such as无水乙醇, 异丙醇,DMSO, Culture Medium,PBSor生盐水etc.) , 当样品对溶剂have特殊需求时, 请in送样时附加所需溶剂;
b.不可溶粉末: 注明样本性质, 灭菌方式, 及分散for均匀悬浮液所需必要步骤,
<such as果不可using分散液, need预试, 样本量可联系our company人员confirm>
注: 默认每组3pcs平行, 每孔Culture Medium加样量100μL.
1. MTT法detectcell活性of原理?
哺乳动物胞of线粒体enzyme可将黄绿色ofMTT降解形成蓝紫色of物质, 用二甲基亚砜 (DMSO) 将其溶解成溶液, 用enzyme标仪determine其浓度 (570nm) , 从而定量determinecellof存活比例.
2. CCK8法detectcell活性of原理?
CCK-8(cell-counting kit-8) detectkitis应用WST-8取代MTT被还原,WST-8is一种类似于MTTof化合物, in电子耦合reagent存inof情况下, can被线粒体内of一些脱氢enzyme还原生成橙黄色offormazan. 对于同样ofcell, 颜色of深浅andcell数目呈线性关系. 应用enzyme标仪determine吸光值 (450nm) 并进行统计学计算便can获得cell毒性相关数据.
3.灭菌方法怎么选择?
目前can开展温高压蒸汽灭菌, 紫外照射灭菌, 还过滤除菌etc.. 高温高压蒸汽灭菌 (121℃,20min) , most彻底of灭菌方法, 推荐用此方法灭菌; or酒精浸泡 (30min) , 但样品不能溶于酒精; 另外紫外照射灭菌 (30min) , 不太彻底, such as需延长照射让灭菌更彻底need提前告知; such as果is液体样品也canadopting过滤除菌 (0.22μmof过滤器) , can除去大部分microorganism.
4.样品制备时adopting直接接触and浸提液have何区别?
a)浸提液试验: 浸提液试验isusing浸提介质浸提样品, 然后through浸提液withcell接触来evaluatecell毒性of方法, 用于cell毒性定性and定量评定.ISO 10993-12标准升版之后, 长期(>24hours,<30days)and持久(>30days)接触of样品in进行cell毒性evaluate时, 推荐of浸提时间is72hours, 因for浸提24hours可能不足以使那些using超过24hoursof器械上of化学物质充分释放.
b)直接接触试验: 直接接触试验isthrough样品直接withcell接触来evaluatecell毒性of方法. 固体样品可直接置于cell层withcell接触, 液体样品可直接放置; 或放置到生物惰性吸水性of基质上withcell接触.
5.such as何选择用MTT法或CCK8法?
MTT: 适用贴壁cell;
CCK8: 适用于贴壁celland悬浮cell, withMTT或其它MTT类似产品such asXTTandMTSetc.相比, usingconvenient, 线性范围相对宽, Sensitivity更高, 重复性也优于MTT, such as样品容易沉淀或残留且易溶于DMSO, recommend选用CCK8法detect.
6.寄送样品量不足
such as果寄送样品量不足, 会造成反复寄样, 影响您of实验weeks期. 所以recommendaccording to上述of
