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生物分子相互作用analyzebased onSPR原理
生物分子相互作用analyzeisbased onSPR原理of新型生物传感analyze技术, 无须进行标记, 也can无须纯化各种生物组分. indays然条件下through传感器芯片实时, 原位and动态测量各种生物分子such as多肽, protein,寡核苷酸, 寡聚糖, as well asvirus, bacteria, cell, 小分子化合物之间of相互作用过程. 表面etc.离子共振is表面增强拉曼ofimportant增强机理之一, 由于贵金属纳米粒子of尺寸效应及量子效应through激发光照射能引起表面etc.离子共振, 从而大大增强拉曼散射信号, 已达到痕量detectof目of.
亲and分子对including:
protein–protein (Protein–Protein)
多肽–受体 (Peptide–Receptor)
antibody–antigen (Antibody–Antigen)
膜受体–配体 (Membrane Receptor–Ligand)
protein–小分子 (Protein–Small Molecule)
protein–nucleic acid (Protein–Nucleic Acid)
cell–配体 (Cell–Ligand)
调and方法
任何一对亲and分子, 一pcs (靶分子) 被键合in生物传感器表面, 另一pcs (analyze物) 被置于溶液中. 当含haveanalyze物of溶液流经靶分子键合of生物传感器表面时, 亲and性复合物生成.
SensiQ配备双通道流动注射analyze式微射流系统, 内have85nL流动池. SensiQusing一times性ofSPR生物传感器, 装卸简便.生物传感器表面包被have单层of羧基化寡聚环氧乙烷(Carboxylated Oligoethyleneoxide) 基质, 可键合多种生物分子, 并have效地阻止非Specificity结合及变性.靶生物分子of这种既被键合in固相生物传感器表面, 又存in于液相中of方式, 增进了两种亲and分子间of接触性, 同时避免了由于人for因素所造成of动力学analyzeof复杂化.
SensiQ备have多种键合方案用于改进实验设计, 以支持生物分子of附着. most常用of偶联方式is用EDC/NHS进行胺偶联. 其它键合方式, for example顺丁烯二酰亚胺-硫醇(Maleimide-thiol) , 还原胺化, 酰肼-醛 (Hydrazide-aldehyde) , 亲and力捕获etc., 亦可using. SensiQ双通道detect中of一pcs通道可用于生成适当of参照曲线. 当表面化学物固定好以后, 加入most多250 μlof样品, 缓冲液流经生物传感器表面时产生stableof基线. 样品注入and计时through自动化控制完成. through实验设置向导功能, user可record多times注射weeks期, 并具备高重复性.
protein-protein, antibody-antigen, protein-小分子, antibody-多肽, protein-DNA, DNA-DNA, protein-纳米材料etc.分子间相互作用力, detect样品中须have一种isprotein, 且两种样品纯度要求均高.
providemost少样品量: protein50-100μg, 小分子20μM/200μL, protein多肽需低温寄送.
信号噪声比低: 由于实验环境, equipment性能或样品质量etc.因素, 可能导致信号噪声relatively高, 影响Experimental Results. 解决方法includingoptimize实验条件 (such as温度, pH值etc.) , 提高equipment性能 (such asusing高Sensitivityof探测器) as well as改善样品质量 (such as提高样品纯度, 减少非Specificity吸附etc.) .
基线漂移: 基线漂移可能is由于温度波动, 溶液流动不stable或光学元件污染etc.原因引起of. for了解决这pcsQuestion, can采取措施stable实验环境 (such asusing恒温装置) , optimize溶液流动条件 (such asusing蠕动泵控制流速) as well as定期清洁光学元件.
样品吸附Question: in某些情况下, 样品可能会非Specificity地吸附in金属表面, 导致Experimental Results不accurate. for了减少非Specificity吸附, canin金属表面修饰一层生物相容性良好of涂层 (such as聚乙二醇, proteinAetc.) , oroptimize样品浓度andincubate时间etc.条件.
金属表面粗糙度: 金属表面of粗糙度会影响SPR信号of强度andstable性. 因此, inusingSPR进行分子相互作用analyze时, need保证金属表面具have良好of光洁度and均匀性. 这canthroughusing高质量of金属薄膜, 严格控制制备工艺as well as定期维护equipmentetc.方式来实现.
实验Reproducibility: for了确保Experimental Resultsofreliable性, needin不同时间, 不同batchestimesand不同实验人员之间保持实验ofReproducibility. 这要求实验条件, equipment参数and样品process方法etc.都要保持一致, 并且need定期对equipment进行校准and维护.
表面etc.离子共振 (Surface Plasmon Resonance, SPR) is一种物理现象, 当光波in金属and介质界面传播时, 金属表面of自由电子会被入射光激发并产生集体振荡. 这种现象被广泛应用于分子相互作用analyze, such as生物传感器, 药物screenandprotein相互作用researchetc.. 然而, inusingSPR进行分子相互作用analyze时, 可能会遇到一些常见Question. 以下is一些可能遇到ofQuestion及其解决方案:
