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Sanger Seq
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Project Introduction

       一代测序由于操作简便, 价格低廉, 而且其accurate度高, 目前仍is测序of金标准. 因for这些优势, 一代测序仍然is目前应用most广泛of测序方法. wein保证测序质量of前提下, 努力改善测序of工艺流程, 提高测序通量, 推行自动化. 平台拥have数百台Thermo  Fisher (以下简称“赛默飞”) 旗下of Applied BiosystemsTM  3730XL测序仪, 能做到日process100,000条以上of常规测序.


业务内容

CE测序:

      毛细管电泳测序 (Capillary Electrophoresis, CE) is建立in原haveof高分辨率变性聚丙烯酰胺凝胶电泳序列analyze法of基础上of一种测序方法. mainlyisusing毛细管作forfor分离通道, 以可流动of聚合物for介质, 用高压直流电场for驱动力of新型液相分离技术. 平台目前usingofABI 测序仪usingof就is毛细管电泳of测序原理, 正常情况下测序ofhave效测序长度不低于700 bp, generally可达850 bp.

[克隆测序] , [Cosmid/Fosmid/BAC末端测序] , [复杂序列测序] , [STR, T-RFLP, AFLP, MLPA片段长度多态性detect]


技术优势

  1. 测序读长较长:平均测序读长较长, 正常情况下 (特殊样品除外) , have效长度不低于700 bp, generally可达到850 bp;

  2.  速度快:收到样品后, most快24hours, 即可收到测序结果;

  3.  have复杂序列测序of能力: can显著提高ITR测序andPoly (A/T) etc.难度序列of测序成功率;

  4.  测序经验丰富:拥have20多年测序经验;

  5.  测序通量高:平均日process100,000条常规测序;

  6.  测序网点遍布全国:全国数十pcs测序网点can保证大部分城市就近安排测序, 节约物流时间.


测序质量保证

      based on标准化of生产流程and严格ofQuality Control流程, 且in软硬件平台, 配套reagentandequipment维护保养校准均来自赛默飞原厂支持下. wein“测序读长”, “测序QV值”and“复杂序列测序成功率”三pcs方面, 给予client高标准of数据and质量保证.


Project Cases

平均测序读长较长, 让您ofData Analysis更快捷.

坚持using赛默飞原厂instrument及reagent, 正常情况下 (特殊样品除外) , have效长度不低于700 bp, generally可达到850 bp.

img5.pngimg5-1.png


测序QV值: 高于中国药典标准, 让您of数据更精准.

中国药典规定“对于质粒DNA测序峰图, 去除引物后峰图of平均Q值需大于30,Q值小于20, of碱基数占总碱基数of百分比需小于1%; 对于PCR产物测序峰图, 除需满足上述要求外, 还需去除两端低质量序列, 且剩余测序峰图of长度需大于PCR产物长度of50%. 除特殊样品外, weofQV值generally都in40以上, 符合中国药典规则.

img6.png


Sample Requirements
样本类型基本要求其他要求store/transport条件预process说明
PCR产物 (已纯化/未纯化)
  • 样本量:

  • >=30 µl (未纯化)

    >=10 µl (已纯化)

  • 浓度:

  • >=100 ng/µl (未纯化)

    >=50 ng/µl (已纯化)

  • 样本量: OD260/280 1.8~2.0

  • 片段长度>=200 bp (such as长度<200 bp, recommend克隆后再测序)

  • 送样前recommend取3 μl样品电泳, 能清晰检出单一明亮目of条带;

  • recommend自带测序引物

4°C 冷藏transport
质粒
  • 样本量: >=20 µl

  • 浓度: >=100 ng/μl

  • 纯度: OD260/280 1.8~2.0

  • have条件情况下recommendprovide200 μl含have相应质粒of菌液备用;

  • 需注明载体全称, 插入目of片段长度, 测序要求

液体质粒: 4°C 冷藏transport 干粉质粒: 常温transport
菌样 (菌液/平板菌落)
  • 样本量: >=200 µl (菌液

  • recommendfor过夜culture (12h) of新鲜菌液;

  • 尽量for高拷贝质粒, such asfor低拷贝质粒, recommend直接provide质粒;

  • 需注明Culture Medium, 载体名称, is否need诱导及抗性类型 (除氨苄and卡那抗性, 其余需自备) ;

4°C 冷藏transport菌液请放入EP管中, 用封口膜封口, 避免交叉污染 平板菌落请圈选标记, 加缓冲垫以防transport中破损


FAQ

    一代测序ofnote事项including:

    1. 样品ofsafe性and无污染: 确保样品in现have实验条件下 (采取一定防护后) 对实验人员本身无伤害, 同时样品对室内, 室外环境无影响. 此外, 任何样品除本样品外不得have其他样品of污染, for example植物样本不得have其它植物of污染, 不得have病害, 不得have虫害; 全血样品不得引入取血物种本身携带of病菌, virusetc.潜in污染.

    2. 样品of标注and信息provide: client或销售人员应将样本of信息详细说明, 所have样品must标注好关键样品信息. 样品信息单must早于或with样品同时到达公司, 以convenient样品中心录样, 同时也convenient项目尽快启动.

    3. 样品of质量and数量: 确保首times取样of样品质量and数量足够, 避免因样品质量不好或数量不足导致项目进度延后. such as果因for样品首times取样不足, 质量不好或信息单未及时到位造成项目进度延后, need由client或销售部承担相关责任.



 
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