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透射电子显微镜 (TEM) is一种高分辨率, 高放大倍数of显微镜, using电子作for光源, through电子枪发射出来of电子束穿透very薄of样品, 电子with样品中of原子碰撞而改变方向, 从而产生立体角散射. 散射角of大小with样品of密度, 厚度相关, 因此can形成明暗不同of影像. 这些影像将in放大, 聚焦后in成像器件 (such as荧光屏, 胶片, as well as感光耦合组件) 上显示出来.
由于电子易散射或被物体吸收, 故穿透力低, must制备更薄of超薄切片 (usuallyfor50~100nm) , 其制备过程with石蜡切片相似, 但要求极严格. 透射电镜of分辨率for0.1~0.2nm, 放大倍数for几万~百万倍, 用于observe超微结构, 即小于0.2微米, 光学显微镜下无法看清of结构, 又称“亚显微结构”.
透射电镜is材料科学researchofimportant手段, 能provide极微细材料oftissue结构, 晶体结构and化学成分etc.方面of信息.
in生物学领域, 透射电镜可用于observecell内部of超微结构, such ascell器, cell核, cell膜etc., as well asvirus, bacteriaetc.microorganismof形态and结构.生物透射电镜isobserveandresearch超微结构ofimportant工具, 可用于observecell整体结构, 亚cell结构. 生物cell样品内部形态observerecommend用专门应用于生物样品observeof透射电镜, 其电压in80-120kvcan降低生物样品因高能电子束辐射而损伤of影响, 同时依赖于生物样品制备技术of发展, such as超薄切片技术, 负stain技术, 冷冻制样技术, cell化学技术etc., 广泛应用于tissue学, cell学, virus学, 病理学及材料学etc.多pcs学科ofresearch中, such as常用来observecell整体结构, cell膜cell壁cell器of变化, 材料进入cell内部of分布情况, cell应付外界刺激产生of自噬小体, as well as外界生物入侵of侵染结构etc.etc..
送样方式:
可接收固定好ofcell/tissue样品并附have详细送检要求of送样单.
①need您provideof样品: 收集cell/tissue取样 (新鲜迅速取材) , 置于1.5mlcentrifuge管内, 加入2.5%of戊二醛溶液 (固定液加满centrifuge管, 使样品完全浸没in固定液中) , 可放置于4°Cstore, 请不要倒弃固定液, generally固定12h后可寄送 (务必adopting1.5mlcentrifuge管寄送) .
②打印填写完整of预约单, 送样单and样品一起寄送.
取材及固定方法such as下:
1.对于cell类, 106以上ofcell, 用cell刮刀刮下来 (不要反复刮取, 动作迅速一times性刮取下来) ,1500-3000转centrifuge, 5-10min, 收集cell于管底肉眼可见2-3粒大米状样品, such as果cell量很多, 把cell团块用细针尖挑成几pcs小团块, 弃上清, 沿管壁缓慢加入4℃预冷of固定液, 然后放入4°C冰箱store.
2.对于tissue类, 新鲜取材, 取材位置accurate, tissue大小尽量in1-2mm³, 离体取材后请立即投入4℃预冷of固定液中, 然后放入4°C冰箱固定store (对于无法下沉of样品, 一定要through抽真空, 让样品沉下去) .
3.对于bacteria类, 吸取OD0.5-0.8ofculture物, centrifuge后弃Culture Medium, 收集菌体沉淀于管底黄豆大小, can用PBS洗1-2times, 弃掉上清液, 沿管壁缓慢加入4℃预冷of固定液, 然后放入4°C冰箱store (固体cultureof标本取样时尽可能把Culture Medium削薄一点, 块切小) .
前process:
倒掉固定液, 用0.1M, pH7.0of磷酸缓冲液漂洗样品三times, 每times15min; 用1%of锇酸溶液固定样品1-2h; 小心取出锇酸废液, 用0.1M, pH7.0of磷酸缓冲液漂洗样品三times, 每times15min; 用梯度浓度 (including30%, 50%, 70%, 80%, 90%and95%五种浓度) of乙醇溶液对样品进行脱水process, 每种浓度process15min, 再用100%of乙醇process20min; most后过度到纯丙酮process20min. 用包埋剂with丙酮of混合液 (V/V=1/1) process样品1h; 用包埋剂with丙酮of混合液 (V/V=3/1) process样品3h; 纯包埋剂process样品过夜; 将经过渗透processof样品包埋起来, 70℃加热过夜, 即得到包埋好of样品. 样品in超薄切片机中切片, 获得70-90nmof切片, 切片经柠檬酸铅溶液and醋酸双氧铀50%乙醇饱and溶液各stain5-10min, 晾干后即可in透射电镜中observe.
交付内容:
每样provide10张拍摄图片 (不provideanalyze服务) , such as需照片数量超过10张, 按照40元/张收费.
1. 2.5%戊二醛固定液such as何配置?
市售25%戊二醛水溶液 10ml
0.2M磷酸盐缓冲液 (pH7.0) 50ml
蒸馏水加至 100ml
2. 0.2M, pH7.0磷酸缓冲液of配置方法?
A液: Na2HPO4·H2O 31.61g, orNa2HPO4·7H2O 53.63g, orNa2HPO4·12H2O 71.64g, 加蒸馏水至1000ml
B液: NaH2PO4·H2O 27.6g, orNaH2PO4·2H2O 31.21g, 加蒸馏水至1000ml
0.2M, pH7.0磷酸缓冲液= A液61ml+B液39ml (合起来is100ml)
