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项目简介:
体外抗菌实验: 体外条件下, determinebacteria/fungus对测试样品of敏感程度. 体外抗菌实验分for抑菌实验and杀菌实验, 抑菌实验可determine仅have抑制bacteria/fungus生长繁殖而无杀灭作用of测试样品; 杀菌实验可determine不仅抑制而且能杀灭bacteria/fungusof测试样品.
抑菌Experimental Methodshave抑菌圈法,OD值法, 共culture+平板涂布计数法 (generallyculture环境forbacteria/fungusCulture Medium) ,MIC.
杀菌Experimental Methodshave共culture+平板涂布计数法 (generallyculture环境forPBS/生理盐水溶液) ,MBC.
一, 抑菌圈测试
(1) Experimental Principle
供试材料含可溶性抗菌成分, 此成分in琼脂Culture Medium中可自由扩散, 形成一定浓度of含药区域. 由于各种microorganism对不同材料或同一材料不同浓度of敏感性不同, 因而形成不同大小直径of抑菌圈.
(2) 参考标准
GBT39101-2020-多肽抗菌性determine 抑菌圈法
NCCLS 药敏试验标准 纸片扩散法
3) Experimental Procedure图
二,OD值测试
(1) Experimental Principle
bacteria悬浮液of浓度in一定范围内with透光度成正比, throughOD值can定性反映出microorganismof浓度或数量.
不同材料按比例with菌液共culture一定时间后, throughrelatively不同组别 (不同材料, 不加材料) 菌液OD值之间of大小来判断不同材料of抗菌性能.
(2) Experimental Procedure图
三, 平板涂布计数测试
(1) Experimental Principle
不同材料with菌液共culture一定时间后, 不同组别 (不同材料, 不加材料) of菌液稀释一定倍数后涂布平板, 以计算出不同组of菌液浓度. throughwithcontrol组relatively, 进而计算出实验组菌液浓度下降百分比, 即得到材料对测试菌株of抗菌性能.
(2) 参考标准
GBT 31402-2015 塑料 塑料表面抗菌性能试验方法
JCT 1054-2007 镀膜抗菌玻璃
GBT 20944.3-2008 纺织品抗菌性能ofevaluate 第3部分震荡法
GBT 21510-2008 纳米无机材料抗菌性能Detection Method
GB/T 23763-2009 光催化抗菌材料及制品抗菌性能ofevaluate
(3) Experimental Procedure图
四,MIC/MBC测试
(1) Experimental Principle
将样品稀释成不同浓度 (二倍稀释法) , 加入到微孔板/无菌试管中, in每pcs孔/试管中加入一定浓度of测试菌, culture一定时间后肉眼observeculture液of混浊情况, such as果is澄清of, 说明没havebacteriaof增长, 即bacteriaof生长得到了抑制, culture液澄清ofmost小样品浓度formost小抑菌浓度, 即MIC.
然后将澄清孔/管 (3pcs样品浓度) 取出涂布于Culture Medium表面, 若无bacteria生长, 则说明测试of菌already被杀灭, 此时of样品浓度formost小杀菌浓度, 即MBC.
(2) 参考标准
YY/T 0688.1-2008临床实验室detectand体外诊断系统 感染病原体敏感性试验with抗菌剂敏感性试验equipmentof性能evaluate
GB/T27623.1-2011 渔用抗菌药物药效试验技术规范 第1部分:常量肉汤稀释法 药物敏感性试验
(3) Experimental Procedure图
可选测试菌种:
1, 抑菌圈测试结果
抑菌圈Result Interpretation:
(1) 抑菌圈测试generally用作样品抑菌性能of定性测试. 若产生抑菌圈, 则说明样品have一定of抗菌性. 若无抑菌圈产生, 说明该测试方法条件下样品无抗菌性.
(2) 针对液体样本可能with浓度呈正相关, 但并不意味着样本浓度越高, 抑菌圈越大. 因for测试样本对指定of测试菌株have一定of抑菌阈值, 且抑菌性还with样本本身扩散性have关.
(3) 取出culture完成of平板, adopting十字交叉法, 用游标卡尺测量抑菌圈 (透明圈) 直径 (mm) , 以直径表示抑菌圈of大小.
抑菌圈直径 (mm) =抑菌圈外径 (mm) - 样品直径/打孔孔径 (mm)
2, OD值测试结果
分组 | OD600 | Average | ||||||||
1times平行 | 2times平行 | 3times平行 | ||||||||
control | 0.658 | 0.783 | 0.636 | 0.665 | 0.812 | 0.637 | 0.724 | 0.752 | 0.637 | 0.700 |
sample | 0.449 | 0.399 | 0.476 | 0.495 | 0.428 | 0.463 | 0.528 | 0.357 | 0.484 | 0.453 |
注: withcontrol组relatively,**P＜0.01
OD值测试Result Interpretation
(1) through差异性analyze,**P＜0.01代表实验组withcontrol组相比, have极显著性差异;*P＜0.05代表实验组withcontrol组相比, have显著性差异;P＞0.05代表实验组withcontrol组相比, 无差异性.
(2) 若OD600值实验组withcontrol组have极显著/显著性差异减小, 则说明材料对测试菌株have抗菌性.
3, 平板涂布计数测试结果
平板涂布测试Result Interpretation:
分组 | 菌落数 | 稀释倍数 | 菌液浓度 (CFU/mL) | 抑菌率 |
control | 237 | 106 | 2.37×109 | / |
1 | 217 | 105 | 2.17×108 | 90.84% |
(1) 结果表格中菌落数for各组相应稀释倍数下of菌落计数结果, 计数原则依据国家标准GB4789.2-2016, 选取菌落数in30 CFU~300 CFU之间来进行菌落计数. inmost小稀释倍数下, 若仍无菌落生长, 则证明样品抑菌效果very明显.
(2) 菌液浓度 (CFU/mL) 计算方式: 菌落数×稀释倍数×10 (0.1 mL稀释液涂布平板)
抑菌率= (1-实验组菌液浓度/control组菌液浓度) ×100%
4,MIC/MBC测试结果
MIC/MBC测试Result Interpretation:
(1) MIC (most小抑菌浓度, Minimal inhibition concentration) 判定标准: 眼观无bacteria生长ofmost低药物浓度确定forMIC.
(2) MBC (most小杀菌浓度, Minimum bactericidal concentration) 判定标准: 眼观清澈of孔/管摇匀, 吸取0.1 mL涂布于固体Culture Medium, culture一定时间后计数, 菌落数少于5pcsofmost低稀释样品浓度确定forMBC.
送样要求:
一, 抑菌圈测试
(1) 块体类 - 薄膜, 布料, 金属块, 纸片, 凝胶etc.
送样量:至少每种菌provide3pcs样品.
制样要求: 金属块, 凝胶类样本须制备成统一大小of圆形/方形, recommend制备直径for6-10 mm圆形. 布料, 纸片类样本可代for裁剪, 默认制备直径for6 mm.
(2) 液体类
送样量: according to测试时样本浓度而定:
①若adopting原液测试, 则样本量for1 mL/种菌;
②若adopting稀释后样本测试, 则须告知稀释倍数及稀释液, 样本量for1 mL/稀释倍数/种菌.
(3) 粉末类
送样量: 因不同样本密度不同, 无法保证每pcs加样孔均能加入etc.量样本, 故recommend样本做分散液, 按照etc.体积加样(每pcs孔most大加样量for0.2 mL), 能提升样本量of一致性. needprovide质量/体积比 (选择合适of样本分散液) , 样本量for质量/体积×1 mL/种菌.
二, OD值测试
(1) 块体类 - 薄膜, 布料, 金属块, 纸片, 凝胶etc.
送样量:needprovide样本with菌液ofculture体系. 比such asX g样本/mL菌液, 样本量for4X g/种菌.
(2) 液体类 (要求样本溶液无色or淡色)
送样量:according to测试时样本of溶剂and浓度而定:
①若溶剂具备杀菌性 (such asDMSO, 乙醇, 甲醇, DMFetc.) , 推荐provide样本浓度for50倍测试浓度, 样本量for0.1 mL/种菌.
举例: 测试材料of溶剂forDMSO, 测试浓度for2 mg/mL. 则需provide样本for100 mg/mL浓度of样本0.1 mL/种菌.
②若溶剂不具备杀菌性 (such asPBS, 纯水, 生理盐水etc.) , 推荐provide样本浓度for10倍测试浓度, 样本量for0.4 mL/种菌.
举例: 测试材料of溶剂for纯水, 测试浓度for2 mg/mL. 则需provide样本for20 mg/mL浓度of样本0.4 mL/种菌.
(3) 粉末类
送样量:needprovide样本with菌液ofculture体系. 比such asX g样本/mL菌液, 样本量for4X g/种菌.
三, 平板涂布计数测试
(1) 块体类 - 薄膜, 金属块, 镀膜玻璃etc.(具备一定of表面积)
测试方法参考国标GBT 31402-2015 塑料 塑料表面抗菌性能试验方 (https://max.book118.com/html/2017/1123/141231780.shtm) , JCT 1054-2007 镀膜抗菌玻璃 (https://www.antpedia.com/standard/5144389-1.html)
送样量:样本量for1pcs/times重复/种菌.
样本尺寸:标准尺寸大小5×5cm, recommendmost小尺寸1×1cm.
(2) 液体类
送样量:according to测试时样本of溶剂and浓度而定:
①若溶剂具备杀菌性 (such asDMSO, 乙醇, 甲醇, DMFetc.) , 推荐provide样本浓度for50倍测试浓度, 样本量for0.03 mL/times重复/种菌.
举例: 测试材料of溶剂forDMSO, 测试浓度for2 mg/mL. 则需provide样本for100 mg/mL浓度of样本0.03 mL/times重复/种菌.
②若溶剂不具备杀菌性 (such asPBS, 纯水, 生理盐水etc.) , 推荐provide样本浓度for10倍测试浓度, 样本量for0.1 mL/times重复/种菌.
举例: 测试材料of溶剂for纯水, 测试浓度for2 mg/mL. 则需provide样本for20 mg/mL浓度of样本0.1 mL/times重复/种菌.
(3) 粉末类
送样量:needprovide样本with菌液ofculture体系. 比such asX g样本/mL菌液, 样本量forX g/times重复/种菌.
四,MIC/MBC测试
(1) 粉末/液体类 (要求样本溶液, 完全溶解且无色or淡色) -微孔板法
送样量:according to测试时样本of溶剂and初始工作浓度而定:
①若溶剂具备杀菌性 (such asDMSO, 乙醇, 甲醇, DMFetc.) , 推荐provide样本浓度for50倍测试浓度, 样本量for0.03 mL/种菌.
举例: 测试材料of溶剂forDMSO, 测试浓度for2 mg/mL. 则需provide样本for100 mg/mL浓度of样本0.03 mL/种菌.
②若溶剂不具备杀菌性 (such asPBS, 纯水, 生理盐水etc.) , 推荐provide样本浓度for10倍测试浓度, 样本量for0.1 mL/种菌.
举例: 测试材料of溶剂for纯水, 测试浓度for2 mg/mL. 则需provide样本for20 mg/mL浓度of样本0.1 mL/种菌.
such as果样本for粉末, 可按照浓度and所需体积计算样本量 (＜10 mg者, 需称量并标记清楚, 避免样本量较少情况下再反复称量造成损耗) .
(2) 粉末/液体类 (样本颜色较重) -平板法
送样量:according to测试时样本工作浓度and浓度pcs数而定. 比such as工作浓度forX g/mL (或µM) , 测试npcs浓度, 样本量for60X*n g (或10X µMof液体样本6*n mL)
(3) 液体类 (样本属于分散液或制备成分散液, 且呈无色or淡色) -试管法
送样量:according to测试时样本工作浓度而定
①若分散剂具备杀菌性 (such asDMSO, 乙醇, 甲醇, DMFetc.) , 推荐provide样本浓度for50倍测试浓度, 样本量for2 mL/种菌.
举例: 测试材料of分散剂forDMSO, 测试浓度for2 mg/mL. 则需provide样本for100 mg/mL浓度of样本2 mL/种菌.
②若分散剂不具备杀菌性 (such asPBS, 纯水, 生理盐水etc.) , 推荐provide样本浓度for10倍测试浓度, 样本量for10 mL/种菌.
举例: 测试材料of分散剂for纯水, 测试浓度for2 mg/mL. 则需provide样本for20 mg/mL浓度of样本10 mL/种菌.
(4) 粉末类 (直接加样) -试管法
送样量:according to测试时样本of工作浓度而定. 比such as工作浓度forX mg/mL (g/mL) , 则样品量for30X mg (g) /种菌.
1. 抗菌活性can测试哪些指标呢? 该怎么选择呢?
OD值, 抑菌圈, 振荡+平板涂布计数法 , MIC, MBC.
1, OD值测试 (适合无颜色干扰, 可溶性样品) ;
2, 抑菌圈测试 (适合活性成分can溶出of样品) ;
3, 振荡culture+平板涂布计数法 (可用于不溶性样品抗菌活性evaluate) ;
4, MIC测试 (适合已validate过具have抗菌活性且无颜色干扰of可溶性样品) ;
5, MBC测试 (适合已detect过具havemost小抑菌浓度of样品) ;
*such as果之前没have做过抗菌实验, recommend先做simpleof抑菌圈orOD值评估下抗菌效果.
2. such as何选择待测菌株?
革兰氏阴性菌代表: 大肠杆菌 (大肠埃希菌) , 铜绿假单胞菌 (绿脓杆菌) ;
革兰氏阳性菌代表: 金黄色葡萄球菌, 枯草芽孢杆菌;
fungus代表: 白色念珠菌 (白色假丝酵母) .
3. 寄送样品量不足
such as果寄送样品量不足, 会造成反复寄样, 影响您of实验weeks期. 所以recommendaccording to上述of
4. 灭菌方式such as何选择?
灭菌方式of选择可参考下图recommend, 但紫外照射灭菌存in灭菌不彻底风险, 尤其is粉末, 棉布, 多孔材料etc.样品.
5. 哪些实验needprovide工作浓度 (即样品量/菌液量) ?
OD值, 共culture+平板涂布计数, MIC/MBC, 这些测试mustprovide工作浓度.
6. control设置Question
①抑菌圈测试, 可选择以不加样品of菌落culture板forblankcontrol, 可免费provide, or若样品for纸片or样品need溶解, 可provide滤纸片or样品of溶剂作forblankcontrol, 可免费provide.
②OD值测试, 默认controlfor不加样品ofetc.量菌液;
③共culture+平板涂布计数测试中.a.常规抗菌实验: 若样品is液体, 平台可have偿provide不加样品ofetc.量菌液forblankcontrol; 若样品is固体, 菌液加于固体样品表面看抑菌效果, 平台可have偿provide将etc.量菌液直接加到平板or孔板中ofblankcontrol. b.黏附/抗黏附实验: with您材料of粘附性质have关, must由您provide不加抗菌成分ofcontrol样品作forblankcontrol.
④MIC/MBC测试, 默认controlfor添加etc.浓度of溶剂.
7. 抑菌实验with杀菌实验have何区别?
抑菌实验 (默认)- 测试样品对bacteriais否具have抑制生长作用, 测试时culture环境forCulture Medium, 即测试过程中bacteriacan继续生长繁殖.
杀菌实验- 测试样品对bacteriais否具have杀灭作用, 测试时culture环境forPBS/生理盐水, 即测试过程中bacteria不再生长繁殖.
8. MICandMBC测试分for微孔板法, 试管法, 平板法, have哪些区别?
MICandMBC测试分for微孔板法 (微量肉汤稀释法) , 试管法 (常量肉汤稀释法) , 平板法 (琼脂稀释法) .
