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MST原理
through对分子间相互作用analyze, 不仅可阐明cell生物学事件, 而且for疾病发生机制and药物发现provide基础. 微量热泳动 (microscale thermophoresis,MST) is一种analyze生物分子相互作用of技术.
MST技术is一种based ondetectin温度梯度中of生物分子电泳迁移率of变化而detect生物分子间结合, 解离过程, 获取分子间相互作用of模式and动力学常数etc.方面信息of新技术, is近年来发展ofresearch生物分子相互作用of强have力工具, 已广泛应用于药物screen, 信号转导, 分子detectand医学诊断etc.生命科学领域.
MSTis一种表征生物分子特性of光学方法, is粒子in微观温度梯度中of定向运动. 将其中一pcs互作分子(大多isprotein)标记荧光染料or融合GFP标签, 将标记proteinand配体分子按照特定of浓度梯度置于毛细管中, 红外激光加热产生一pcs微观of温度梯度场发生热泳动, 其水化层, 分子大小, 电荷etc.分子性质会随着热泳动发生改变, 进而引起反应体系中荧光分布of变化.
MSTinstrumentthroughrecord激光器打开前, 打开期间and打开后处于温度梯度中of样品内部红外激光照射区域of荧光变化情况, 从而实现较短时间ofdetermine. MST除了能精确detect生物分子间相互作用, through计算解离常数(Kds), 还能得到have关生物分子互作of其他参数, 实现精确of定性analyze.
优点:
①detect下限低, 弱分子力首选;
②需固定样品, 且样品用量较小, ug级别就能开展detect;
③无需usingantibody, 无需获得高纯度protein, 直接usingTris-NTA dye标记His-Tag融合protein, 即可上机进行detect;
④be able to测量复杂生物溶液 (cell裂解物, Serum, wash剂, 脂质体etc.) ;
⑤相互作用物尺寸范围广;
⑥不仅能定性两pcs生物分子of互作关系, 还can定量判断结合of亲and力强弱.
缺点:
①need内部荧光或荧光标记 (受标记效率, Specificityand荧光猝灭of影响) ;
②无动力学信息 (即缔合率and解离率) and浓度analyze;
③若互作proteinwith其他分子形成复合体or于其他分子存in竞争, 会影响结合数据;
④若protein存in翻译后of修饰, 不同体系detectof数据会发生漂移;
⑤若待测proteinin实验体系中stable性不佳, 会影响数据ofstable性.
MST应用范围
1, protein-小分子相互作用analyze (proteinenzymewith抑制剂, cell膜protein活性)
2, protein-protein相互作用analyze (includingantigen-antibody, 分子伴侣-substrate)
3, protein-肽相互作用analyze
4, 肽-肽相互作用analyze
5, protein-nucleic acid相互作用analyze
6, nucleic acid-nucleic acid相互作用analyze
7, nucleic acid适配子-小分子相互作用analyze
小分子药物withprotein相互作用analyze
题目: Paris saponin VII, a Hippo pathwayactivator, induces autophagy and exhibits therapeutic potential against humanbreast cancer cells;
期刊: Acta pharmacologica Sinica, 医学一区, IF=7.169;
research内容: throughMST技术detect发现小分子化合物PSVIIwithHippo通路关键proteinLATS1, MOB1, MST2存in相互作用. research揭示了PSVII抑制乳腺癌of分子机制, for乳腺癌of治疗provide了新of治疗靶点及靶向治疗药物用于后续research.
MST技术validatePSVIIwithLATS1, MOB1, MST2of相互作用
proteinwithnucleic acid相互作用analyze
题目: High Osmotic Stress Increases OmpK36Expression through the Regulation of KbvR to Decrease the AntimicrobialResistance of Klebsiella pneumoniae;
期刊: Microbiology Spectrum, microorganism学二区, IF=9.043;
research内容: usingMST技术, through标记纯化ofKbvRprotein, 定量detect其withompK36andmodA启动子区之间结合作用, 发现了KbvRbe able to直接调控OmpK36of表达.
MST技术validateKbvRwithOmpK36of亲and力
providemost少样品量: protein1mg, 小分子100mM/1mL, protein多肽需低温寄送.
送样详情可联系技术经理详细沟通.
Sample Preparation: 确保样品纯度高, 无杂质, 并避免using对测试have干扰of溶剂或添加剂. 同时, 样品of浓度and体积应符合instrument要求.
荧光标记: MST测试needutilizing荧光信号来detect分子间of相互作用, 因此need对样品进行荧光标记. in选择荧光染料时, 应考虑其对样品of亲and性, 光stable性as well as荧光信号of强度. 同时, 标记过程应避免对样品产生不良影响.
instrument校准: in进行MST测试前, 应对instrument进行校准, 确保测试结果ofAccuracy. 校准including光学系统of校准, 温度控制系统of校准etc..
实验条件: MST测试of实验条件including温度, pH值, 离子强度etc., 这些条件会对测试结果产生影响. 因此, in实验前应仔细选择andoptimize实验条件, 以获得reliableof结果.
Data Processing: MST测试产生of数据need进行processandanalyze, 以提取have用of信息. inprocess数据时, 应note去除背景信号, 拟合曲线etc.步骤, 以获得accurateof结合常数 (Kd) etc.信息.
重复实验: for了确保测试结果ofreliable性, recommend进行多times重复实验, 并对结果进行Statistical Analysis.
微量热泳动 (MST) 测试is一种用于research分子间相互作用of技术, 具haveSensitivity高, 样品用量少etc.优点. in进行MST测试时, neednote以下事项:
