One-on-one consultation
Scan QR code to consult
Contact: +86 15884474332
Professional & Reliable · PhD Expert Team
Credit Payment · Test First, Pay Later
High Cost-effectiveness · Quality & Affordable
Earn Points · Exchange for Rewards
Easy Reimbursement · Official Contract & Invoice
Reports Available · Apply Now
免疫组化, is应用免疫学基本原理 - -antigenantibody反应, 即antigenwithantibodySpecificity结合of原理, through化学反应使标记antibodyof显色剂(荧光素, enzyme,金属离子,同位素) 显色来确定tissuecell内antigen (多肽andprotein) , 对其进行定位, 定性及相对定量ofresearch, 称for免疫tissue化学技术(immunohistochemistry)或免疫cell化学技术(immunocytochemistry).
antibodyandantigen之间of结合具have高度ofSpecificity, 免疫tissue化学正isutilizing了这一原理. 先将tissue或cell中of某种化学物质提取出来, 以此作forantigen或半antigen, through免疫动物后获得Specificityofantibody, 再以此antibody去探测tissue或cell中of同类ofantigen物质. 由于antigenwithantibodyof复合物is无色of, 因此还must借助于tissue化学of方法将antigenantibody结合of部位显示出来, 以期达到对tissue或cell中of未知antigen进行定性, 定位或定量ofresearch.
免疫tissue化学技术按照标记物of种类可分for免疫荧光法,免疫enzyme法, 免疫铁protein法,免疫金法及放射免疫自显影法etc..
这些常用免疫tissue化学方法of原理such as下:
1. 免疫荧光cell化学技术
将已知antibody标上荧光素,以此作for探针检查cell或tissue内of相应antigen,in荧光显微镜下observe.当antigenantibody复合物中of荧光素受激发光of照射后会发出一定波长of荧光,从而can确定tissue中ofantigen定位或定量.
2. 免疫enzymecell化学技术
is免疫tissue化学research中most常用of技术．基本原理is先以enzyme标记ofantibodywithtissue或cell作用, 然后加入enzymeofsubstrate, 生成have色of不溶性产物或具have一定电子密度of颗粒, through光镜或电镜, 对cell或tissue内of相应antigen进行定位或定性research．
3. 免疫胶体金技术
就is用胶体金标记一抗, 二抗或其他of能Specificityof结合免疫球proteinof分子 (such as葡萄球菌Aprotein) etc.作for探针对tissue或cell内ofantigen进行定性, 定位或定量research．由于胶体金of电子密度高, 多用于免疫电镜of单标记或多标记of定位research．
标本
实验所用mainlyfortissue标本andcell标本两大类, 前者including石蜡切片(病理切片andtissue切片) and冰冻切片, 后者includingtissue印片, cell爬片andcell涂片.
其中石蜡切片is制作tissue标本most常用, most基本of方法, 对于tissue形态store好, 且能作连续切片, have利于各种staincontrolobserve; 还能长期存档, 供回顾性research; 石蜡切片制作过程对tissue内antigen暴露have一定of影响, 但可进行antigen修复, is免疫组化中首选oftissue标本制作方法.
antibody
免疫组化实验中常用ofantibodyfor单克隆antibodyand多克隆antibody, 单克隆antibodyis一pcsB淋巴cell克隆分泌ofantibody, 应用cell融合杂交瘤技术免疫动物制备. 多克隆antibodyis将纯化后ofantigen直接免疫动物后, 从动物血中所获得of免疫Serum, is多pcsB淋巴cell克隆所产生ofantibody混合物.
常用stain方法
according to标记物of不同分for免疫荧光法, 免疫enzyme标法, 亲andtissue化学法, 后者is以一种物质对某种tissue成分具have高度亲合力for基础ofDetection Method. 这种方法敏感性更高, have利于微量antigen (antibody) incell或亚cell水平of定位, 其中生物素 - 抗生物素stain法most常用.
免疫组化项目测试结果, with样品process, 样品store, 一抗antibody质量have很大关系, 若样品过多, 请先做预实验看看效果后, 再全部送样. we可provide冰袋, 但干冰需client自己provide, 或收取一定干冰费用.
背景stain: 背景stainis指in非Specificity区域出现ofstain, 这可能is由于antibody浓度过高, incubate时间过长, tissueprocess不当或reagent质量Questionetc.原因引起of. for了减少背景stain, can尝试降低antibody浓度, 缩短incubate时间, optimizetissueprocess或usingSpecificity更强ofantibody.
非Specificitystain: 非Specificitystainis指antibodywithtissue中of非目标antigen结合, 导致in错误of位置出现stain. 这可能is由于antibodySpecificity不足, tissueprocess不当或reagent交叉反应etc.原因引起of. for了避免非Specificitystain, can选择Specificity更强ofantibody, optimizetissueprocess或using阻断剂来减少非Specificity结合.
stain强度不一致: in进行免疫组化实验时, 可能会出现不同tissue切片或同一tissue切片不同区域之间ofstain强度不一致. 这可能is由于tissueprocess不一致, antibody浓度或incubate时间不stableetc.原因引起of. for了解决这pcsQuestion, can确保Experimental Procedureof标准化and一致性, includingtissueprocess, antibody浓度andincubate时间etc.参数ofstable性.
脱片: 脱片is指instain过程中tissue从载玻片上脱落. 这可能is由于tissue固定不牢, 载玻片process不当或stain过程中of操作Question引起of. for了防止脱片, canusing粘附剂process载玻片, optimizetissue固定andstain过程中of操作技巧.
antigen丢失: antigen丢失is指intissueprocess过程中目标antigenof丢失. 这可能is由于tissue固定不及时, 固定液选择不当或固定时间过长etc.原因引起of. for了减少antigen丢失, can尽快固定tissue, 选择合适of固定液and固定时间, 并intissueprocess过程中避免过度washand高温process.
免疫组化 (IHC) is一种常用of实验技术, 用于detecttissue或cell中of特定antigen. 然而, in进行免疫组化实验时, 可能会遇到一些常见Question. 以下is一些常见of免疫组化Question及其可能of原因and解决方案:
