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琼脂糖凝胶电泳is一种电泳形式, 用于according tonucleic acid (DNA或RNA) 片段of大小进行分离. 当施加电流时, 带负电ofDNA/RNAthrough琼脂糖凝胶of孔隙向凝胶带正电of一端迁移, 较小of片段迁移较快. 由此产生of条带can用紫外线 (UV) 光来observe.
动物tissue:100 mg(黄豆大小), most少50 mg(绿豆大小), 脂肪tissue, 结缔tissue, 纤维化tissue适当增加, 干冰transport.
cell:1×10^6pcscell. cell沉淀or加入trizolofcell样本 (不要直接transport加trizolofCell Culture皿) , 干冰transport.
全血: most少1 mL新鲜血液EDTA抗凝管, -20℃transport.
Serum: most少1 mL, 干冰transport.
植物: 新鲜of叶, 果肉, 种子etc.需100 mg, 干冰transport.
PCR产物: 体积≥10 μL, 干冰transport.
原因: 可能isDNA条带分子量过大, 分子量接近ofDNA条带没have分开, 电泳缓冲液using不当, 电泳时间过长或电压过高导致DNA走出凝胶, or电极插反.
解决方法: 对于分子量过大ofDNA条带, canusing脉冲凝胶电泳; 选择适当of凝胶浓度进行电泳以分离分子量接近ofDNA条带; according to电泳缓冲液of性质选择合适of电泳条件; 缩短电泳时间, 调整电压; 确保电极连接正确.
原因: 可能is电泳缓冲液多timesusing后失效, nucleic acid部分降解, nucleic acid样品纯度差, 含haveDNA结合protein或高浓度of盐copies, 电压过低或电泳时间过长, stain时间过长或拍照前放置过久.
解决方法: 定期更换电泳缓冲液; using不含nucleic acidenzymeofreagentandconsumables制备样品; through酚/仿抽提或乙醇沉淀去除protein, 盐copiesetc.杂质; according to凝胶大小and电泳缓冲液类型, using适当of电压进行电泳; 电泳结束后及时observe, 拍照.
Question: 微波炉溶解琼脂糖时, 胶液可能冲溢出三角锥瓶; 琼脂糖没have完全溶解会造成电泳图像背景模糊不清; 加热后水分蒸发可能导致凝胶浓度不accurate.
解决方法: 确保总液体量不超过三角锥瓶of50%容量; 对于2%以上of胶液, using中火加热; 当胶液剧烈沸腾时, 停止加热, 摇动三角锥瓶, 然后再times加热直至胶液清澈; such as需补水, 应加入热of蒸馏水, 并摇匀.
1.条带缺失:
2.条带模糊或弥散:
3.凝胶制备Question:
